PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其確度高達(dá)納米級別。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過程中有哪些問題需要注意的。
一、PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來源有哪些?
1.樣本間交叉感染:
收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)導(dǎo)致外溢;不同樣本移液時(shí)忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖;移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時(shí)消毒滅菌;不同樣本同時(shí)開蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散,相互交叉污染。
2.實(shí)驗(yàn)試劑污染:
主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中,因?yàn)镻CR試劑對溫度十分敏感,需要通過冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0℃,但這個過程也充滿污染風(fēng)險(xiǎn)。
3.擴(kuò)增產(chǎn)物污染:
大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開蓋,這是PCR反應(yīng)中最主要、最常見的污染問題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可形成假陽性。
4.克隆質(zhì)粒污染:
作為陽性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。
二、PCR實(shí)驗(yàn)室污染應(yīng)急處理方法
1、若核酸樣本溢出:
立即用布或紙巾覆蓋,由外圍向中心傾倒10%的次氯酸消毒劑,約30分鐘后,清除污染物品,再用次氯酸消毒劑擦拭,并用75%酒精噴灑,移動紫外車定點(diǎn)照射1小時(shí)。
2.其他不明情況污染:
1、暫停所有實(shí)驗(yàn)操作;
2、清理實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有物品,尋找污染來源;
3、加大實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng);
4、對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有表面(臺面、地面及墻面) 進(jìn)行消毒;
5、75%酒精空中噴霧;
6、開啟紫外消毒裝置,延長紫外照射時(shí)間(4小時(shí)以上);
7、以上措施每日進(jìn)行,直至污染消除;用新試劑及確認(rèn)無污染的器材進(jìn)行原污染項(xiàng)目的試劑空白檢測,連續(xù)3次均陰性后方可進(jìn)行常規(guī)檢測。
負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室,是檢測病毒樣本的最基本條件。所謂負(fù)壓,就是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)氣壓比實(shí)驗(yàn)室外環(huán)境的正常氣壓要低,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外產(chǎn)生一定的壓力差,從而控制氣體流動的方向,保證氣流從實(shí)驗(yàn)室外流向?qū)嶒?yàn)室內(nèi),負(fù)壓能確保室內(nèi)空氣不會泄漏出去造成污染,可以有效的保護(hù)環(huán)境。